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Carla Gugino débute sa carrière à la fin des années 80 en apparaissant dans des séries comme Madame est servie, Alf ou encore Code Quantum et fait ses premiers pas au cinéma en 1993 avant d'enchaîner les tournages à un rythme effrénée.
Elle alterne ensuite entre séries (Entourage, Karen Sisco) et films Spy-Kids, Sin City, La nuit au musée (Ben Stiller), La loi et l'ordre (Robert de Niro, Al Pacino) avant de décrocher le personnage de Sally Jupiter/Le Spectre Soyeux dans Watchmen Les Gardiens en 2009.
Carla Gugino est ou sera aussi à l'affiche des films Our Lady of Victory (David Boreanaz) et Every Day (Helen Hunt, Liev Schreiber).